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面议NovoNGS CUT Tag 2.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina):上海近岸科技出品。CUT&Tag(Cleavage Under Target & Tagmentation)是一种新兴的蛋白质-DNA互作研究方法,被用来替代传统的ChIP-Seq方法。CUT&Tag在高活性转座酶上融合了protein A/G抗体结合功能域,该功能域部分可以与靶向目的位点的抗体结合,使得Tn5转座酶在目的位点上被原位栓系,并且在目的位点附近进行打断的同时引入必要的接头序列,随后提取的DNA在经过PCR扩增后直接得到用于测序的文库。相比于被广泛应用的ChIP-Seq方法,CUT&Tag所需的细胞量更少,具有更高的信噪比和更好的可重复性。不需要进行甲醛交联固定和超声波打断,也不需要通过连接法添加测序接头,在简化操作、节省时间的同时,也提供了应用于单细胞测序研究的可能性。
试剂盒中包含了用于孵育抗体、转座体,转座体片段化的缓冲液和文库构建的整套相关试剂,并同时提供用于固定细胞的刀豆球蛋白A(ConA)磁珠。通过将细胞固定在ConA磁珠上,简化了更换反应体系和连续洗涤的操作,可以实现一管式操作。使用试剂盒提供的试剂和相应的实验流程,从细胞收集到PCR文库构建的整个实验流程可以在一天内完成。整个试剂盒中的所有酶和试剂都经过严格的质量控制和残留检测,确保了所获得文库的质量和稳定性。
NovoNGS CUT Tag 2.0 High-Sensitivity Kit (for Illumina)产品用途:
蛋白质-DNA互作研究,在常见的哺乳动物细胞系上用于替代传统的ChIP-Seq方法,特别适用于细胞数量较少的小样本。也可应用于经过特殊处理的植物和酵母样品上。
转座体单链接头序列:
Adaptor 1:
5’-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3’
Adaptor 2:
5’-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG -3’
ME:
5'-pCTGTCTCTTATACACATCT-3'
转座体单链接头序列:
5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC-Index2(i5)TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-xxxxxxxxx-CTGTCTCTTATACACATCTCCGAGCCCACGAGACIndex1(i7)-ATCTCGTATGCCGTCTTCTGCTTG-3’